“竖锯”约翰•克莱默（Tobin Bell 饰）肉体虽死，但精神长存。这一次，某医疗保险公司的老总威廉•伊斯顿（Peter Outerbridge 饰）成为他狩猎和考验的目标。威廉贪婪狡诈，他发明了一套医保的计算公式，同时凭借爪牙的协助，成功向无数病入膏肓的人们拒保，从中赚取黑心钱财。然而他没有想到，自己有朝一日也要将生命的决定权交与别人手中。他必须按照“竖锯”的游戏规则，小心翼翼寻找逃生之路。
第二关是让男主角选着两个人的生死（一个是年迈的老太，有儿子，一个是孤独的年轻人，孤儿）最后选择了老太，年轻人被吊死
第三关是帮助对方规定时间内逃脱去拿钥匙，不然会被刺死，男主角必须打开闸门然对方过去，每一个闸门都充满滚烫的蒸汽，所以打开要有心理准备。。后来对方过去了，看见说明说钥匙在男主角肚子里。。旁边有个电锯.....但是男主角逃开了。。对方死了..
第四关是男主角的职员（大概有10个）坐在旋转的轮盘上，每旋转一次就会有枪对阵他们，让男主角选择两个活下来的人，选择一次要被针插自己的手（最后男主角选择了两个女的，最后那男的还骂他重色轻友，让他看着他死去..）
最后是让对方决定男主角生死。。（男主角是保险公司的，对方父亲得了癌症却没有赔钱）对方的母亲下不了手。。于是儿子自己按了开关..男主角被腐蚀...
男主角的妹妹亲眼看着他死去
另一方面，竖锯的妻子收到了竖锯最后留给她的6个目标任务，她把前五个给了霍警察（第五部和竖锯合作）最后一个是霍警察他自己，妻子用电把他击晕然后带上头盔（那头盔是第一部阿曼达那种）但是霍警察利用类似窗户的铁栏杆（横的）及时挡住了面具的张开（张开嘴巴就会撕裂）然后强行挣脱了面具。。可怜啊，他一边的腮给撕开了...但是活下来了（他自己的考验）
两个贪心的借贷者，塔内加·霍华德饰演的西蒙妮与马蒂·莫雷饰演的爱迪，均被电锯门戴上了一套钉于胸部的头部机械装置。游戏规定：想生还的人必须在一分钟之内割去比对方更多的自身的肉体，否则就会被钉穿头颅。体型明显超重的胖子爱迪拼命切去腹部的赘肉，扔到天平托盘上，但在另一边，西蒙妮疯狂地将自己的胳膊切断，这一颇具勇气的求生之举挽救了她的生命，同时也宣告了败者爱迪的死亡。
马克·罗斯顿饰演的FBI长官丹·埃里克森（蓝牙伯）领导FBI探员和警局干探们调查爱迪被杀案，他们在现场发现了彼得·斯特拉姆的指纹。蓝牙伯将这一线索告知寇斯塔思·曼迪罗饰演的马克·霍夫曼警官，并对后者透露了“在第4部中遭BILLY木偶机关射中面部生命垂危的琳塞·皮瑞兹探员并没有牺牲”的讯息。
霍夫曼与吉儿·塔克秘密会面，吉儿将五个从神秘箱中取出的信封交给2叔。
第6部的主线游戏者名叫威廉·伊斯顿（由彼德·奥德布里奇扮演），他是一家人身保险公司的经理。他和他的几个部下平日里非常自私地无视投保人的身体状况，拒绝承担投保人理应获赔的保险金。威廉曾傲慢地否决了老头要求的人寿保险赔偿。
威廉被电锯门绑架，关押于一个废旧的仓库间里。他被悬挂在半空中，腰部被一把巨大的夹钳卡住，其所在公司的一名老年清洁工（是个烟鬼）也以同样的方式被固定在威廉对面。两人都被戴上呼吸面罩，一呼吸，腰部的巨钳就会夹紧。无奈，二人只能比谁能屏住呼吸，威廉凭着比老年人更为强壮的体力憋得更久从而赢得“火影忍者”游戏的胜利，身单力薄的老人很快就被夹爆肋骨而亡。
为了移除绑定于胳膊和腿上的炸弹，威廉必须在60分钟之内完成四个游戏任务。他的第2关叫做“纲手羁绊”游戏，他必须双手各抓住一根链条的末梢，两根链条连接着两个平台上站着的人，分别是威廉的两位属下，一个是年轻的文档管理员，一个是年纪稍大的秘书阿蒂嫂。绞索缠住了两人的脖子，威廉的任务是：想要救一边的话，必须放弃另一边。威廉最终选择了有家室的阿蒂嫂，而眼睁睁看着文档管理员被活活吊死。
顿哥的第三关叫做“蒸汽之屋游戏”。卡洛琳·凯芙饰演的公司律师黛比，胸口被安放了一台尖利的钉桩装置，她必须在90秒内穿过蒸汽迷宫找到解开装置的钥匙。为救黛比，顿哥勇敢地打开阀门，将蒸汽转向自身，坚强地用躯体挡住蒸汽，为黛比争取时间和空间。就在迷宫的尽头，黛比从一张X光照上发现，那把能救她的救命钥匙早已植入进顿哥的胸腔内！黛比恩将仇报，舞动着圆锯向顿哥袭来，但因为时间用尽终被机关搞死。
身心俱疲的顿哥来到第四关“六道轮回游戏”。他发现他的六个年轻下属坐在死亡轮盘上旋转着，有一把定时射击的枪如同毒蛇的舌信般紧盯着他们。游戏规则要求威廉忍住双手的刺痛去推动按扭以挽救其中2个人的性命。听完他们一个个的垂死讲述后，顿哥做出了生死抉择，救下了2位女性职员并继续前进。至此，顿哥的游戏剩余时间只余1秒。
最后，顿哥来到一个骇人的房间，他发现自己站在两个笼子的中间，里面关着的分别是他的妻子------第5部的女记者帕梅拉·詹金斯以及一对母子-----塔拉和布伦特。塔拉的丈夫哈罗德生前曾向威廉的公司投过保险，但当他因病逝世后威廉却拒绝承认该份保险合同的有效性。每个笼子里都装有大容量的氢氟酸。塔拉和布伦特突然找到了一个标有“生”和“死”的拉闸。原来这个游戏就是为塔拉和布伦特准备的，他们的考验就是：要么除掉这个冷血鬼；要么宽恕他的罪责。塔拉不忍心拉闸，但是布伦特毫不犹豫地选择了“死”！氢氟酸针头万箭齐发，全数刺入威廉体内，可怜顿哥由内而外被腐蚀得一干二净，帕梅拉被此等人间罕见的惨状吓得花容失色，惊恐万分。
片中有几段重要的闪回镜头。首先交代了威廉和老头第一次见面是在吉儿的戒毒诊所开业典礼上。也有讲述老头将香妮·史密斯饰演的阿曼达·杨介绍给吉儿认识的镜头，老头想向妻子证明电锯门事业蓬勃发展，未来大有前途。另外，还交代了2叔和阿曼达作为电锯门大师兄和小师妹，相互都认识，2叔参与了1-4大多数游戏的安装过程，两人关系最重要的一点就是第3部黄色信封中信纸的问题，原来当年是阿曼达唆使男友西塞去吉儿的诊所偷取毒品，导致吉儿流产，老头不知道这点，2叔出于自身利益考虑在信上写道：“你若不杀莲恩，我就把你害死吉登（老头的孩子）的事告诉师傅”。帕梅拉·詹金斯在肉厂找到这封信，复印了一份交给了吉儿。还有一段闪回则交代了老头早已为吉儿准备了稳妥的安全计划以保护吉儿在自己死去后不被警方怀疑。
话分两头，这边厢蓝牙伯和小皮正根据前后案件中拼图印记割取方式不同和录象带声音这2条线索继续追查新拼图案，试图将塞斯·巴克斯特钟摆巨斧游戏中的录象带中BILLY娃娃的声音还原成原声，把2叔急得坐立不安。就在声纹鉴证员验证出录象带中的声音正是2叔时，2叔突然暴走，闪电般秒杀蓝牙伯，小皮和声纹鉴证员，随后他利用小斯的残肢在案发现场留下小斯的指纹后扬长而去。
螳螂捕蝉，黄雀在后。正当2叔在监控室观看“二柱牢游戏”时，吉儿用电击器电晕了他。吉儿将一面升级版死亡头盔（和第1部阿曼达戴的差不多）套在2叔头上，告诉他：“箱子里还有第6个信封，我没给你，是用在今日收你的皮，白白了您内。”吉儿把门关上后，2叔如困兽般使劲挣扎，在付出一手半嘴的巨额代价后，霍夫曼奇迹般活了下来，从此江湖上多了个“裂嘴男”的传说。
全片完